新知應用小學堂

2021/03
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2021/03/09 讓Vivaspin濃縮管來幫助您~快速完成透析和緩衝液體交換!!

普遍大家都知道濃縮是藉由超濾膜來進行蛋白質和DNA等濃縮和純化,且可以透過不同膜材質搭配不同樣品特性來提高蛋白質的回收率。
但今天要來告訴大家濃縮管除了濃縮回收步驟外,也可以輕鬆利用濃縮管來透析(去鹽)和緩衝液體的交換

一般來說,蛋白質可以被合適的超濾膜截留,但鹽類可以自由透過,不受蛋白質濃度和膜分子截留量影響,因此蛋白質濃縮後,濾出液和截留液中的緩衝液成分會保持不變,如此一來,即可利用水或無鹽緩衝液對濃縮物進行稀釋,達到透析的效果;亦可利用新的緩衝液稀釋濃縮物,進而完全置換緩衝物質。
當然Sartorius出產的Vivaspin濃縮管,更可以完美有效的做到濃縮、透析和置換緩衝溶液,因為Vivaspin具有其獨特且出色的特性:
 
  ●專利的垂直膜設計
  ●保留死體積回收器
  ●多種低吸附性的膜材質選擇,讓樣品找到合適的膜


經測試結果如下表: Vivaspin濃縮管在第一次離心時,即去除95%以上的鹽,隨後再進行第二次離心,即可去除99%鹽類,且樣品回收率>92%。

只要掌握一些技巧便可以有效做到「透析+濃縮」一步到位的小訣竅,幫您省去使用透析袋後再離心濃縮的時間!!

●進行透析和緩衝液體置換,您只需要根據以下步驟:
1.選擇適合您樣品的截留分子量MWCO。
2.加入適當的樣品體積
3.若樣品小於最大裝置之濃縮管體積,可在離心之前將其稀釋到最大體積,可有助於提高透析效果。
4.以適當的離心轉速進行離心。
5.清空濾液管中的濾液。
6.利用合適的溶劑再次填滿濃縮管。
7.再次進行離心。
8.清空濾液管中的濾液。
9.利用pipetman從濃縮管的底部得到濃縮且脫鹽的樣品。

★★最後再來複習一次,使用Vivaspin的濃縮管可以做到哪些事情呢?
● 樣品去鹽: 使用Vivaspin濃縮管進行透析與緩衝液置換。
● 樣品濃縮: 使用Vivaspin濃縮管濃縮,可濃縮到最終體積。
● 樣品回收: 使用Vivaspin濃縮管處理,可改善低濃度蛋白質樣品回收率。​
 

2021/03/23 精確控制細胞株表現,有效抵禦COVID19威脅

全球COVID-19爆發,再次提醒學界重視快速開發新疫苗的迫切需要,以擊退新的病毒性疾病威脅。在建立生產流程時,有效且快速的進行製程開發是非常重要的。Applikon Bioreactor可穩定監控多種細胞株,包含T細胞、Vero細胞、昆蟲細胞等培養放大過程,尤其以控制器my-control進行特定的培養參數制訂與調整,穩定且精確的控制細胞的表現行為,同時以資訊整合分析軟體Lucullus PIMS具備DoE, Reactor planning、Parallel processing、Reporting等多項功能,協助操作者快速完成製程相關的數據分析,廣泛應用於細胞治療、抗體製造、器官模擬等領域。

由於昆蟲細胞在懸浮系統中生長良好,可以在攪拌式生物反應器中輕鬆進行細胞量放大,而桿狀病毒的優勢則是可以快速適應新的病毒株,因此,桿狀病毒昆蟲細胞(Baculovirus insect cell)的表現系統是用於生產病毒疫苗的重要平台。本篇研究sf9昆蟲細胞培養比較Applikon AppliFlex ST一次性生物反應器與miniBio高溫高壓玻璃生物反應器的性能,同時比較多孔式供氣管(porous sparger)與單一開口式供氣管(open hole sparger)對於培養效能的差異。在測試參數溶氧量30%、溫度27 ℃、轉速600 rpm的控制之下,從結果可知,使用單一開口式供氣管進行400 ml培養7天,可以獲得較高的viable cell density (約1.2-1.6x10^7 cells/ml)及cell viability (75-90%)。


Applikon一次性生物反應器免去清潔確效的需求,顯著減少備槽時間,藉由3D列印製造技術針對槽體設計提供更大的靈活性,包含供氣管的孔洞大小與數量、攪拌葉高度、上蓋的管線連接位置與數量等皆能進行客製化。在建立生產流程時,更能有效且快速的完成製程開發!